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微生物菌剂标准

作者:admin 发布时间:2019-06-16 21:36

  微生物菌剂标准(NY/T 883—2004 2007-09-2810:25:33 (已经被浏览 190 农业部微生物肥料和食用菌菌种 质量监督检 验测试中心 中华人民共 和国农业行业标准 NY/T 883— 2004 农用微生物 菌剂生产技术规程 Technical Regulation Production 一、微生物菌剂标准(NY/T 883—2004 2007-09-2810:25:33 (已经被浏览190 农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 883—2004 农用微生物菌剂生产技术规程 Technical Regulation AgriculturalMicrobial Inoculants 2005-01-04 发布 2005-02-01 实施 中华人民共和国农业部 发布 本标准的附录A、B、C为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心、农业部肥料质量监督检验测试中心(沈阳)。 本标准主要起草人:李力、李俊、姜昕、沈德龙、王来福、于向华、陈慧君。 生产技术规程 范围本规程规定了农用△▪▲□△微生物菌剂生产中所涉及的生产环境、生产车间、菌种、发酵增殖、后处理、包装、储运及质量检 验等技术环节作出要求。 本标准适用于农用微生物菌剂产品。 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘 误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡 是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB 3095-1996 环境空气质量标准 GB 3838-2002 地表水质量标准 生产环境及生产车间要求3.1 生产环境 厂区空气质量达到大气环境质量标准GB3095-1996 中类标准要求; 发酵用水达到地表水质量标准GB3838-2002 中类水质要求,冷却水及其他用水达到标准中类水质要求; 3.2 生产车间 生产技术流程农用微生物菌剂的一般生产技术环节为:菌种种子扩培发酵培养后处理包装产品质量检验出厂。流程图 见附录A。 4.1 菌种 4.1.1 原种 原种是生产用菌种的母种,对原种的要求如下: 菌种的企业编号、来源等信息。4.1.2 菌种的保存和管理 采用合适的方式保存菌种,确保无杂菌污染,菌种不退化。应选用一种以上适宜的方法保藏,常见菌种类型及相应保藏方式见附录B; 建立菌种档案。4.1.3 菌种质量控制 在生产之前,应对所用菌种进行检查,确认其纯度和应用性能没有发生退化。出现污染或退化的菌种不能作为生产用 菌种,需进行4.1.4 或4.1.5 操作。 4.1.4 菌种的纯化 菌种不纯时,应进行纯化。可采用平板划线分离法或稀释分离法,得到纯菌★-●=•▽种。必要时可采用显微操作单细胞分离器 进行菌种分离纯化。 对纯化的菌种应进行生产性能的检查。 4.1.5 菌种的复壮 菌种发生下列现象之一,应进行菌种复壮: 其他重要特▪▲□◁性的退化或丧失;菌种复壮方法:回接到原宿主或原分离环境传代培养,重新分离该菌种。 4.2 发酵增殖 4.2.1 种子扩培 原菌种应连续转接活化至生长旺盛后方可应用。 种子扩培过程包括试管斜面菌种、摇瓶(或固体种子培养瓶)、种子罐发酵(或种子固体发酵)培养三个阶段,操作 过程要保证菌种不被污染、生长旺盛。 4.2.2 培养基 培养基重要原料应满足一定的质量要求,包括成分、含量、有效期以及产地等。对新使用的发酵原料需经摇瓶试验或 小型发酵罐试验后方可用于发酵生产。 4.2.2.1 种子培养基 种子培养基要保证菌种生长延滞期短,生长旺盛。原料应使用易被菌体吸收利用的碳、氮源,且氮源比例较高,营养◁☆●•○△ 丰富完全,有较强的pH 缓冲能力。最后一级种子培养基主要成分应接近发酵培养基。 4.2.2.2 发酵培养基 发酵培养基要求接种后菌体生长旺盛,在保证一定菌体(或芽胞、孢子)密度的前提下兼顾有效代谢产物。原料应选 用来源充足、价格便宜且易于利用的营养物质,一般氮源比例较种子培养基低。 可采用对发酵培养基补料流加的方法改善培养基的营养构成以达到高产。 4.2.3 灭菌 常用的灭菌方式及适用对象见附录C。 4.2.3.1 高压蒸汽灭菌操作要求 液体培养基、补料罐(包○▲-•■□括消泡剂)、管道、发酵设备及空气过滤系统灭菌温度为121~125(压力0.103Mpa~0.168Mpa),0.5h~1.0h。液体培养基装料量为50%~75%发酵罐容积。 固体培养基物料灭菌温度为121~130,1.0h~2.0h;或采用100灭菌2h~4h,24h 后再灭菌一次。 在高温灭菌会产生对菌体生长有害物质或对易受高温破坏物料灭菌时,应采用物料分别灭菌或降低灭菌温度延长时间。 培养基灭菌后按4.2.3.2 进行检查。若灭菌不彻底,培养基不得使用。 4.2.3.2 灭菌效果检查 采用显微镜染色观察法和/或发酵管试验法检查培养基的灭菌效果。 4.2.3.2.1 染色观察法 若镜检发现有菌体,即可认为灭菌不彻底,需要进行4.2.3.2.2操作,无活菌体后培养基方可使用。 若未发现菌体,初步认为灭菌彻底,培养基可以使用。在必要时,可进行4.2.3.2.2操作,以进一步确认培养基灭 菌彻底。 4.2.3.2.2 发酵管试验法 用无菌操作技术将1mL 供试培养基加至5mL 已灭菌的营养肉汤中,重复三次。置于37培养,24h 菌体即可认为灭菌彻底。反之,即可判定培养基灭菌不彻底。4.2.4 无菌空气 发酵生产中所通入的无菌空气采用过滤除菌设备制得,空气过滤系统应采用二级以上过滤。对制得的无菌空气▽•●◆按如下 步骤检验合格后方可用于发酵生产。 用无菌操作技术,向装有100mL~200mL 无菌肉汤培养基的三角瓶中通入待监测滤过空气10min~15min。三角瓶置于37 培养,24h 内无浑浊、镜检无菌体即判定合格。 4.3 发酵控制 4.3.1 接种量的要求 在多级发酵生产阶段,对生长繁殖快的菌种(代时

  6h),接种量不低于10%。 4.3.2 培养温度 发酵温度应控制在25~35,对特殊类型的菌种应根据其特性而定。在发酵过程中,可根据菌体的生长代谢特性在 不同的发酵阶段采用不同的温度。 4.3.3 通常采用的供氧方式•●是向培养基中连续补充无菌空气,并与搅拌相配合,或者采用气升式搅拌供氧。对于好氧代谢的菌株或兼性厌氧类型菌株,培养基中的溶解氧不得低于临界氧浓度;严格厌氧类型菌株培养基的氧化 还原电位不得高于其临界氧化还原电位。 4.3.4 物料含水量 固体发酵初期适宜发酵的物料含水量为50%~60%。发酵结束时,应控制在20%~40%。 4.3.5 发酵终点判断 下列参数为发酵终点判定依据: 监测发酵液中还原糖、总糖、氨基氮、pH值、溶解氧浓度、光密度及粘度等理化参数; 监测发酵过程中摄氧率、CO2产生率、呼吸熵、氧传递系数等发酵代谢特征参数; 固体发酵中物料的颜色、形态、气味、含水量等变化。4.4 后处理 后处理过程可分为发酵物同载体(或物料)混合吸附和发酵物直接分装两种类型。 4.4.1 发酵物同载体(或物料)混合吸附 对载体及物料的要求如下: 细度、有毒有害元素(Hg、Pb、Cd、Cr、As)含量、pH、粪大肠菌群数、蛔虫卵死亡率值达到产品质量标准要 有利于菌体(或芽胞、孢子)的存活。发酵培养物与吸附载体需混合均匀,可添加保护剂或采取适当措施,减少菌体的死亡率。吸附和混合环节应注意无菌 控制,避免杂菌污染。 4.4.2 发酵物直接分装 对于发△▪▲□△酵物直接分装的产品剂型,可根据产品要求进行包装。 4.5 建立生产档案 每批产品的生产、检验结果应存档记录,包括检验项目、检验结果、检验人、批准人、检验日期等信息。 4.6 产品质量跟踪 定期检查产品质量,并对产品建立应用档案,跟踪产品的应用情况。 (资料性附录)农用微生物制剂生产工艺流程示意图(略) (资料性附录)农用微生物菌剂生产中菌种的常用保藏方式 保藏方式 一般存放条件 适合的微生物菌种类型 一般保存期限 冻干管保藏 冰箱或室温 各类菌种 年以上沙土管保藏 干燥条件 芽胞杆菌、真菌、放线菌 年以上石蜡油保藏 4冰箱 各类菌种 年以上甘油管保藏 -18冰箱或更低温度 主要是细菌 年以上固体曲保藏 干燥条件,4冰箱 产生各类孢子的线左右冰箱 各类菌种 个月~12个月 (资料性附录)农用微生物制剂的生产中常用灭菌方法及适用对象 灭菌方式 操作要求 一般应用对象 高压蒸汽灭菌 115~130,20 min~60min 培养基,耐热器皿,废弃物 干热灭菌 160~170,1.5 ~2h耐热器皿,耐热物料 紫外线h 以上 洁净间,洁净台 化学药剂灭菌 浓度和用量根据具体情况而定 洁净间,设备及器材 辐射灭菌 辐射强度和时间根据具体情况而定 不适宜于热灭菌的物料 膜过滤除菌 过滤器的膜孔径0.2μ 空气,不宜于热灭菌的试剂二、生物有机肥( NY 884-2004 范围本标准规定了生物有机肥的要求、检验方法、 检验规则、标识、包装、运输和贮藏。 本标准适用于生物有机肥。 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括 勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。 凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB 8170—1987 数值修约规则 GB 18877—2002 有机-无机复混肥料 GB/T 1250-1989 极限数值的表述方法和判定方法 GB/T 19524.1—2004 肥料中粪大肠菌群的测定 GB/T 19524.2—2004 肥料中蛔虫卵死亡率的测定 NY 525—2002 有机肥料 NY/T 798—2004 复合微生物肥料 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。 生物有机肥 指特定功能微生物与主要以动植物残体(如畜禽粪便、农作物秸秆等)为来源并经无害化处理、腐熟 的有机物料复合而成的一类兼具◆◁•微生物肥料和有机肥效应的肥料。 要求4.1 菌种 使用的微生物菌种应安全、有效,有明确来源和种名。 4.2 外观(感官):粉剂产品应松散、无恶臭味;颗粒产品应无明显机械杂质、大小均匀、无腐败味。 4.3 技术指标 生物有机肥产品的各项技术指标应符合表1 的要求。 0.200.20 有机质(以干基计),% 25.025.0 水分,% 30.015.0 pH 5.5~8.55.5~8.5 粪大肠菌群数,个/g(mL) 100蛔虫卵死亡率,% 95有效期,月 4.4生物有机肥产品中As、Cd、Pb、Cr、Hg 含量指标应符合NY/T 798—2004 中4.2.3 的规定。 4.5 若产品中加入无机养分,应明示产品中总养分含量,以(N+P2O5+K2O)总量表示。 抽样方法对每批产品进行抽样检验,抽样过程应避免杂菌污染。 5.1 抽样工具 抽样前预先备好无菌塑料袋(瓶)、金属勺、剪刀、抽样器、封样袋、封条等工具。 5.2 抽样方法和数量 在产品库中抽样,采用随机法抽取。 抽样以袋为单位,随机抽取5~10 袋。在无菌条件下,从每袋中取样200~300g,然后将所有样品混匀,按四分法分装 试验方法6.1 外观 用目测法测定:取少量样品放在白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中,仔细观察样品的形状、质地,应符合4.2 要求。6.2 有效活菌数测定 应符合NY/T 798—2004 中5.3.2 的规定。 6.3 有机质的测定 应符合NY 525—2002 中5.2 的规定。 6.4 水分测定 应符合NY/T 798—2004 中5.3.5 的规定。 6.5 pH 值测定 应符合NY/T 798—2004 中5.3.7 的规定。 6.6 粪大肠菌群数的测定 应符合GB/T 19524.1—2004 的规定。 6.7 蛔虫卵死亡率的测定 应符合GB/T 19524.2—2004 的规定。 6.8 As、Cd、Pb、Cr、Hg 的测定 应符合GB 18877—2002 中5.12~5.17 的规定。 6.9 N+P2O5+K2O 含量测定 ▼▲应符合NY 525—2002 中5.3~5.5 的规定。 检验规则7.1 检验分类 7.1.1 出厂检验(交收检验) 产品出厂时,应由生产厂的质量检验部门按表1 进行检验,检验合格并签发质量合格证的产品方可出厂。出厂检验 时不检有效期。 7.1.2 型式检验(例行检验) 一般情况下,一个季度进行一次。有下列情况之一者,应进行型式检验。 国家质量监督机构进行抽查。7.2 判定规则 本标准中产品技术指标的数字修约应符合GB 8170 的规定;产品质量合格判定应符合GB/T 1250 中修约值 比较法的规定。 具下列任▪•★何一条款者,均为合格产品 在产品的外观、pH值、水分检测项目中,有1 项不符合标准要求,而产品其它各项指标符合标准要求。 具下列任何一条款者,均为不合格产品 As、Cd、Pb、Cr、Hg中任一含量不符合标准要求; 产品的外观、pH值、水分检测项目中,有2 项以上不符合标准要求。 标识、包装、运输◇•■★▼和贮藏生物有机肥的标识、包装、运输和贮藏应符合NY/T 798—2004 章的规定。三、有机肥料标准( NY 525-2002 更新时间:2006-8-111:15:11 (已经被浏览38 标准类别:NY-行业标准(农业)关键词:有机肥料 标准号:NY 525—2002 标准名称:有机◇…=▲肥料* 标准分类:农业土壤化肥标准 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本标准起草单位:农业部微生物肥料质量监督检验测试中心、中国农业科学院土壤肥料研究所。 本标准主要起草人:沈德龙、李俊、姜昕、陈慧君、曹凤明、关大伟、李力。 生产技术规程 范围本标准规定了有机肥料的技术要求、试验方法、检测规则、标识、包装、运输和贮存。 本标准适用于以畜禽粪便、动植物残体等富含有机质的副产品资源为主要原料,经发酵腐熟后制成的有机肥料。 本标准不适用于绿肥、农家肥和其他农民自积自造的有机粪肥。 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的 内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不 注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T601 化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备 GB/T1250 极限数值的表示方法和判定方法 GB/T6679 固体化工产品采样通则 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB8172 城镇垃圾农用控制标准 GB/T8576 复混肥料中游离水含量测定 线 肥料标识 内容和要求 术语和定义下列术语和定又适用于本标准。 有机肥料 organicfertilizer 主要来源于植物和(或)动物,施于土壤以提供植物营养为其主要功能的合碳物料。 要求4.1 外观;有机肥料为褐色或灰褐色,粒状或粉状,无机械杂质,无恶臭。 4.2 有机肥料的技术指标应符合表1 的要求。 30总养分(氮 +五氧化二磷 +氧化钾)含量(以干基计)/(%) 4.0水分(游离水)含量 20酸碱度 pH 5.5-8.0 4.3 有机肥料中的重金属含量、蛔虫卵死亡率和大肠杆菌值指标应符合 GB8172 的要求。 试验方法本标准中所用水应符合 GB/T6682 中三级水□◁的规定。所列试剂,除注明外,均指分析纯试剂。试验中所需标准溶液,按 GB/T601 规定制备。 5.1 外观 目视、鼻嗅测定。 5.2 有机质含量测定(重铬酸钾容量法) 5.2.1 方法原理 用定量的重铬酸钾—硫酸溶液,在加热条件下,使有机肥料中的有机碳氧化,多余的重铬酸钾用硫酸亚铁溶液滴定,同时 以二氧化硅为添加物作空白试验。根据氧化前后氧化剂消耗量,计算有机碳含量,乘以系数1.724,为有机质含量。 5.2.2 仪器、设备 通常实验55 6g,加水和 c(1/2H2SO4)=6mol/L 的硫酸30mL 溶解,稀释定容到1L,摇匀备用。此溶液的准确浓度以0.1mol/L 重铬酸钾标准溶液(5.2.3.4)标定,现用现标定。 c(FeSO4)=0.2mol/L 标准溶液的标定:吸取重铬酸钾标准溶液(5.2.3.4)20.00mL 加入150mL 三角瓶中,加浓硫酸(5.2.3.2) 3mL-5mL 滴-3滴邻啡口罗啉指示剂(5.2.3.6),用硫酸亚铁标准溶液(5.2.3.5)滴定。根据硫酸亚铁标准溶液滴定 时的消耗量按式(1)计算其准确浓度 V2式中:c1———重铬酸钾标准溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L); V1———吸取重铬酸钾标准溶液的体积,单位为毫升(mL); V2———滴定时消耗硫酸亚铁标准溶液的体积,单位为毫升(mL)。 5.2.3.6 邻啡口罗啉指示剂:称取硫酸亚铁(分析纯)0.695g 和邻啡口罗啉(分析纯)1.485g 于100mL水中,摇匀备用。 5.2.4 测定步骤 称取过Φ0.5mm 筛的风干试样0.3g-0.5g(精确至0.0001g),置于500mL 的三角瓶中,准确加入1mol/L 重铬酸钾标准溶 液(5.2.3.3)30.00mL,充分摇匀后加浓硫酸60mL,缓缓摇动1min,加一弯颈小漏斗,置于沸水中保温30min,每隔约 5min 摇动一次。取出冷却至室温,用水冲洗小漏斗,洗液承接于三角瓶中。取下三角瓶,将反应物无损转入250mL 容量 瓶中,定容,吸取50mL 溶液于250mL 三角瓶内,加水约100mL,加2-3 滴邻啡口罗啉指示剂(5.2.3.6),用0.2mol/L 硫酸亚铁标准溶液(5.2.3.5)滴定近终点时,溶液由绿色变成暗绿色,再逐滴加入硫酸亚铁标准溶液直至生成砖红色为 止。同时称取0.2g(精确至0.001g)二氧化硅(5.2.3.1)代替试样,按照相同分析步骤,使用同样的试剂,进行空白验。 如果滴定试样所用硫酸亚铁标准溶液的用量不到空白试验所用硫酸亚铁标准溶液用量的三分之一时,则应减少称样量,重 新测定。 5.2.4 分析结果的表述 肥料有机质含量以肥料的质量分数表示,按式(2)计算: c(V0-V)0.0031.724 有机质(%)= 100„„„„„„(2) 式中:c———硫酸亚铁标准溶液的摩尔浓度,单位为摩尔每升(mol/L);V0———空白试验时,使用硫酸亚铁标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL); V———测定时,使用硫酸亚铁标准溶液的体积,单位为毫升(mL); 0.003———四分之一碳原子的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol); 1.724———由有机碳换算为有机质的系数; m———试样质量,单位为克(g); X0———风干试样的含水量; D———稀释倍数:50/250。 5.2.6 允许差 5.2.6.1 取平行分析结果的算术平均值为最终分析结果。 5.2.6.2 平行测定的绝对差值应符合表2 要求。

  45 1.0 不同实验室测定结果的绝对差值应符合表3 要求。 有机质/(%)绝对差值/(%)

  45 2.0 5.3 全氮含量测定 5.3.1 方法原理 有机肥料中的有机氮经硫酸 -过氧化氢消煮,转化为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸溶液吸收,以标准酸溶液滴定, 计算样品中全氮含量。 5.3.2 试剂 5.3.2.1 硫酸(ρ 1.84)。 5.3.2.2 30%过氧化氢。 5.3.2.3 氢氧化钠:质量浓度为40%的溶液。 称取40g 氢氧化钠(化学纯)溶于100mL 水中。 5.3.2.4 硼酸:质量浓度为2%的溶液。 称取2g 硼酸溶于100mL 约60热水中,冷却,用稀碱在酸度计上调节溶液 pH=4 5.3.2.5定氮混合指示剂:称取0.5g 溴甲酚绿和0.1g 甲基红溶于100mL95%乙醇中。 5.3.2.6 硫酸[c(1/2H2SO4)=0.05mol/L]或盐酸[c(HCl)=0.05mol/L]标准溶液:配制和 标定,按照 GB/T601 进行。 5.3.3 仪器、设备 通常实验室用仪器设备和定氮蒸馏装置。 5.3.4 分析步骤 5.3.4.1 试样溶液制备 0.5mm筛的风干试样0.5g(精确至0.0001g),置于开氏烧瓶底部,用少量水冲洗沾附在瓶壁上的试样,加5.0mL 硫酸(5.3.2.1)和1.5mL 过氧化氢(5.3.2.2),小心匀,瓶口放一弯颈小漏斗,放置过夜。在可调电炉上缓慢升温至硫 酸冒烟,取下,稍冷后加15 滴过氧化氢,轻轻摇动开★▽…◇氏烧瓶,加热10min,取下,稍冷后分次再▪…□▷▷•加5-10 滴过氧化氢并分 次消煮,直至溶液呈无色或◆●△▼●淡黄色清液后,继续加热10min,除尽剩余的过氧化氢。取下稍冷,小心加水至20mL-30mL, 加热至沸。取下冷却,用少量水冲洗弯颈小漏斗,洗液收▷•●入原开氏烧瓶中。将消煮液移入100mL 容量瓶中,加水定容,静 置澄清或用无磷滤纸干过滤到具塞三角瓶中,备用。 5.3.4.2 空白试验 除不加试样外,试剂用量和操作同5.3.4.1。 5.3.4.3 测定 5.3.4.3.1 蒸馏前检查蒸馏装置是否漏气,并进行空蒸馏清洗管道。 5.3.4.3.2 吸取消煮清液50.0mL 于蒸馏瓶内,加入200mL 水。于250mL 三角瓶加入10mL 硼酸溶液(5.3.2.4)和5 合指示剂(5.3.2.5)承接于冷凝管下端,管口插入硼酸液面中。由筒型漏斗向蒸馏瓶内缓慢加入15mL氢氧化钠溶液 (5.3.2.3),关好活塞。加热蒸馏,待馏出液体积约100mL,即可停止蒸馏。 5.3.4.3.3 用硫酸标准溶液或盐酸标准溶液(5.3.2.6)滴定馏出液,由蓝色刚变至紫红色为终点。记录消耗酸标准溶液 的体积(mL)。空白测定所消耗酸标准溶液的体积不得超过0.1mL。 5.3.5 分析结果的表述 肥料的全氮含量以肥料的质量分数表示,按式(3)计算: (V-V0)c0.014D 100„„„„„(3)m(1-X0) 式中:V———试液滴定消耗标准酸溶液的体积,单位为毫升(mL); V0———空白滴定消耗标准酸溶液的体积,单位为毫升(mL); c———酸标准溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L); 0.014———氮的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol); D———分取倍数,定容体积 /分取体积,100/50; m———称取试样质量,单位为克(g); X0———风干试样的含水量。 所得结果应表示至两位小数。 5.3.6 允许差 5.3.6.1 取两个平行测定结果的算术平均值作为测定结果。 5.3.6.2 两个平行测定结果允许绝对差应符合表

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